آماده سازی نمونه:
جمع آوری نمونه: نمونه هایی مانند خون ، بافت ، بزاق و ادرار را با توجه به هدف آزمایش جمع آوری کنید.
استخراج DNA: از یک کیت استخراج DNA اختصاصی برای استخراج DNA از نمونه استفاده کنید.
آماده سازی واکنش PCR:
آغازگرهای طراحی: طراحی جفت های آغازگر خاص بر اساس توالی هدف برای تقویت DNA الگو.
مخلوط واکنش را آماده کنید: از جمله DNA الگوی ، آغازگرها ، بافر ، پلیمراز DNA ، DNTPS (Triphosphates deoxynucleoside) ، Mg 2+ ، و غیره.
تنظیم برنامه PCR:
تنظیمات ابزار PCR: پارامترهای چرخه PCR از پیش تعیین شده ، مانند دمای پیش گرم شدن 95 درجه ، دمای دناتوراسیون (مانند 95 درجه) ، دمای آنیل شدن (مانند 55 درجه) ، دمای پسوند (مانند 72 درجه) و تعداد چرخه را وارد کنید.
واکنش PCR:
نمونه را اضافه کنید: مخلوط واکنش را به مخزن واکنش PCR یا تراشه اضافه کنید و هر نمونه معمولاً یک واکنش به خوبی دارد.
انجام PCR: چرخه ابزار PCR مطابق برنامه از پیش تعیین شده ، از جمله مراحل گرمایش ، سرمایش ، بازپخت و پسوند.
تجزیه و تحلیل محصول:
خنک کننده پس از تقویت: پس از اتمام PCR ، نمونه به طور خلاصه در 4 درجه خنک می شود.
جداسازی الکتروفورز: از فناوری الکتروفورز ژل ، مانند الکتروفورز ژل آگارز ، برای جدا کردن محصولات PCR با طول های مختلف استفاده کنید.
اسکن فلورسانس: آغازگرهای دارای برچسب فلورسانس نور از طول موج خاص در محصول تقویت شده را ساطع می کنند و ابزار PCR این سیگنال ها را می خواند و آنها را ضبط می کند.
پردازش و تفسیر داده ها:
نرم افزار تجزیه و تحلیل داده ها: از نرم افزار تخصصی برای تجزیه و تحلیل سیگنال فلورسنت و محاسبه غلظت یا غلظت نسبی قطعه هدف استفاده کنید.
تفسیر نتیجه: بر اساس منحنی PCR و پایه ، تعیین کنید که آیا PCR موفقیت آمیز است ، آیا قطعه هدف وجود دارد و چه مقدار آن است.
ضبط و حفظ نتیجه:
نتایج را در گزارش تجربی ثبت کرده و داده ها و نمونه های اصلی را به درستی حفظ کنید.